El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la adición fraccionada del crioprotectorDimetilformamida y la viabilidad espermática pre y post descongelamiento. Se utilizaronseis sementales de la raza criollo colombiano. La dimetilformamida se añadió de lasiguiente manera: T1: adición de una décima parte del crioprotector por minuto; T2:adición de una décima parte del crioprotector cada dos minutos y T3: adición de unadécima parte del crioprotector cada tres minutos. Para los tratamientos, el semen semantuvo diluido y a temperatura ambiente, durante un periodo medio de una hora y diezminutos. Posteriormente las muestras se enfriaron a 5ºC utilizando una tasa deenfriamiento de 0,25ºC / min. Las curvas se realizaron de la siguiente forma: C1: Curvade enfriamiento de 0,25 ° C a 5 ° C, curva de descogelación rápida que va directamente alvapor de nitrogeno, C2: Curva de enfriamiento de 0,25 ° C a 5 ° C, temperatura deequilibrio por 45 minutos, curva lenta en congelador y C3: Curva de enfriamiento 0,25 ° Ca 5 ° C, temperatura de equilibrio por 45 minutos, curva rápida en vapor de nitrogeno.Despues de congelar las muestras, se sumergieron en nitrogeno líquido. Ladescongelación se realizó a 52ºC durante diez segundos, se sumergieron las muestras enagua a temperatura de 37ºC bajo un tiempo de treinta segundos. Inmediatamentedespues se evaluo la Motilidad total, motilidad progresiva y vigor espermático, bajomicroscopía óptica (40x). En el análisis estadístico no se observaron diferenciasestadisticamente significativas (P<0,05) entre los tratamientos y las curvas, tampoco seproduce interacción entre los mismos. Los resultados mostraron que existe viabilidad delos espermatozoides despues de la descongelación con la adición fraccionada delcrioprotector Dimetilformamida.Palabras Clave: Crioprotector, espermatozoides equinos, Dimetilformamida