ABSTRAKProtease dari isolat termo-halofilik Pria Laot Sabang strain A (PLS A) telahberhasil dimurnikan, dikarakterisasi, dan diaplikasikan pada penyamakan kulitsapi. Pemurnian protease dilakukan dalam dua tahap yaitu pengendapan dengangaram amonium sulfat pada tingkat kejenuhan 20-40% dan dilanjutkan dengankromatografi kolom penukar anion DEAE-Sepharose. Karakterisasi proteasemurni dilakukan untuk mempelajari pengaruh suhu, pH, konsentrasi NaCl, danvariasi pelarut organik terhadap aktivitasnya. Selain itu, berat molekul proteasejuga ditentukan dan diaplikasikan pada penyamakan kulit sapi. Aktivitas spesifikprotease hasil pengendapan amonium sulfat adalah 505,4 U/mg dengan tingkatkemurnian 6,7 kali dibandingkan ekstrak kasarnya. Aktivitas spesifik proteasehasil kromatografi DEAE-Sepharose adalah 3821,33 U/mg dengan tingkatkemurnian 50,8 kali dibandingkan ekstrak kasarnya. Berat molekul protease hasilpemurnian adalah 13,6kDa dengan aktivitas optimum pada suhu 60oC(termostabil), pH 7 (netral), konsentrasi NaCl 5M (halostabil) dan pelarut nonpolar (n-heksan). Protease dapat diaplikasikan pada proses perendaman danpencucian kulit mentah dalam industri pengolahan kulit.Kata kunci : Isolat PLS A, protease, termostabil, halostabil, penyamakan kulit