Protease merupakan enzim yang berperan dalam menghidrolisis polipeptida menjadi oligopeptida atau asam amino. Protease digunakan dalam industri detergen, makanan, kulit dan tekstil. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan aktivitas spesifik tertinggi dari bakteri Bacillus sp termofilik isolat kawah Sabang hasil fraksinasi aseton. Aktivitas spesifik tertinggi diperoleh pada fraksi IV dengan persen kejenuhan aseton 60-80% sebesar 1,41 unit/mg. Fraksi ini mempunyai tingkat kemurnian 2.10 kaii dibandingkan ckstrak kasamya. Protease yang dihasilkan ini merupakan protease alkali yang bersifat termostabil. Karakterisasi protease menunjukkan bahwa aktivitas optimum adalah pada suhu 700C, konsentrasi substrat kasein 2%, pH 10 dan waktu inkubasi enzim-substrat 20 menit. Protease alkali termostabil dari Bacillus sp ini memiliki V man 238, I umol/menit dan KM80 mM.Kata Kunci : Protease alkali termostabil, Bacillus sp, fraksinasi aseton